三种药用石斛多糖身分的比较研讨

2018-05-30 10:38:21 揭晓

文章滥觞:浙江大教教报(工教版)2004年238卷第2期:249-252

做者:华允芬陈云龙

浙江大教 生命科教教院 浙江 杭州  

 

研讨了细茎石斛细叶石斛和铁皮石斛三种药用动物石斛正正在多糖量量分数散布构成以及分子相对量量巨细上的差别使用糖含量测定办法阐发三种石斛差别部位的总多糖 TPs和水溶性多糖WPs使用糖醛酸和卵白量量量分数测定离子交流柱色谱以及凝胶柱色谱办法阐发阐揭晓明铁皮石斛TPsWPs量量分数均为最高细叶石斛WPs量量分数较着低于其他两种三种石斛多糖正正在各部位散布情况存正正在差别差别石斛的WPs构成和分子相对量量巨细也差别阐发证明三种药用石斛正正在多糖量量分数散布构成及分子相对量量巨细上具有较着差别

关键词 细茎石斛细叶石斛铁皮石斛多糖

 

石斛味甘微寒无毒入胃肾经具有滋阳清热生津益胃润肺止咳益精补肾壮筋补实之效果为传统珍贵中药其滥觞动物有70多种铁皮石斛细茎石斛以及细叶石斛为药用石斛的重要滥觞动物现代科教研讨表明石斛的药理做用取其所含多糖有着密切关联有关药用石斛多糖含量方面的研讨已有文献报导

为了进一步理解差别石斛动物中多糖的差别,本文对上述三种石斛中的多糖量量分数,构成及相对分子量量巨细做一研讨。

 

1检验考试部门

1.1质料和仪器

铁皮石斛( Dendrobium officinale Kimura etligo)、细茎石斛( Dendrobium moniliforme(L.)Sw.)、细叶石斛( Dendrobium hancockii rolfe),均为多年生全草,20005月中旬采自云南,经淅江大教动物科教研讨所傅承新传授核定。全草洗净,杀青后于60C烘箱中烘干,一部门根据长度比例分为茎上、茎中、茎下、根四部门分别粉碎,其他部门全草粉碎,60目筛备用Waters高效液相色谱仪, Waters-2410示差合光检测仪;LKB柱色谱系统;RE-52A型旋转蒸发仪; Shimadzu Uv-265FW型紫外可见分光光度计;Sephacryl S-400HRSephacryl S-200HRAmersham Pharmacia Biotech产物; Dextran系列为Flu-ka产物;DEAE-纤维素为上海恒疑生化有限公司产;其他试剂为国产阐发纯。

 

1.2检验考试办法

1.2.1石斛多糖量量分数测定石斛样品粉末经乙醇回流提取小分子纯量后,单调,称取1.000g,100mL提取液,90C恒温水浴3h,加水补重,过滤,取部门滤液密释,效果按硫酸-苯酚比色法测定其量量分数.以水提取的多糖记为水溶性多糖(wa-ter soluble polysaccharides WPS),5E.0. 15 mol/L硫酸溶液提取总多糖( total polysaccharides Tps),每个样品平止处理3,取均匀值。

1.2.2 多糖获得 石斛全草粉末经 95%乙醇提取后,20倍体积水,90C,每次1h,提取3,过滤,兼并滤液,减压浓缩,4倍乙醇体积沉淀数次,再溶解,浓缩,透析,冻干,得石斛多糖。

1.2.3糖醛酸量量分数测定按文献办法,以尺度氢氧化钠滴定,效果换算成葡糖醛酸。

1.2.4卵白量量量分数测定 Lowry法。

1.2.5多糖离子交流柱色谱阐发离子交流柱色谱:DEAE纤维素(3.5cm×55cm);柱温:12C;流速:2ml./min;举措相:NaCl溶液;梯度形式:时间梯度为02004006008001000min,相应NaCl浓度梯度为00.050.10.20.30.5mol/L;苯酚硫酸法检測洗出峰中性糖量量分数测定:会萃水洗脱峰,浓缩,冻干,获得物记为中性糖.称重,计较中性糖正正在多糖中所占比例

1.2,6多糖凝胶柱色谱阐发中性糖部门经Sephacryl s-400(2. 6 cm X60 cm), Sephacryl $-200(1.6cm×20cm)凝胶浸透柱色谱纯化,紫外扫描检测其卵白量量分数.会萃洗脱峰部门,浓缩,冻干,获得物和尺度多糖 Dextran系列经 HPGPC阐发(Ultrihydrogen M2502000二柱串联,举措相:0.1mol/L磷酸缓冲液),由尺度多糖的相对分子量量对数取洗脱体积求得尺度曲线,再由尺度曲线求得样品的重均相对分子量量。

 

2 效果取会商

2.1 石斛差别部位多糖量量分数阐发

三种石斛差别部位多糖量量分数的测定效果见 1

42c87195bf152e7b8bec3731cc44ff0.png

测定效果表明,三种石斛的总多糖量量分数均比较,此中铁皮石斛高于其他两种;而且差别部位的总多糖量量分数散布有较大差别:细茎石斛由高到低顺次为上、下、中、根部,细叶石斛顺次为上、中、下、根部,铁皮石斛为中、上、下、根部,三种石斛的水溶性多糖量量分数以铁皮石斛为高,细茎石斛次之,细叶石斛最低,它们占全草总重分别为15.02%12.31%4.45%,那取细叶石斛口感味淡相吻合; 同样,差别部位的水溶性多糖量量分数散布也有差别;细茎石斛以上部最高,顺次为下、中、根部,且差别不大。

 

2.2 多糖身分差别阐发

三种石斛水溶性多糖中的中性唐、糖醛酸以及卵白量量量分数存正正在较着差别,见表2.

22240d57e08343743dd6fb500657903.png

2.3多糖离子交流柱色谱阐发

三种石斛水溶性多糖分别经DEAE-纤维素柱色谱阐发,顺次以水以及0.050.10.20.30.5mol/ L. Nacl溶液梯度洗脱,获得6个洗脱组分,记为组分1(中性糖)I、Ⅱ、NV、Ⅵ.除组分I占绝大部门,其他组分洗脱峰见图1,由图1可知,细茎石斛、细叶石斛均为组峰』、Ⅳ为高,其他较低;而铁皮石斛则是组峰Ⅲ为高,隐现较着差别的特征,最高峰比较,细叶石斛(1.0)高于细茎石斛(0.9),铁皮石斛(0.8)最低,取糖醛酸量量分数阐发效果不合。

86fca2a00bdb539c60e4265cc5201fa.png

2.4多糖凝胶柱色谱阐发

三种石斛中性糖经 Sephacryl系列纯化后,经紫外扫描,发如今280nm处无吸收峰,表明其不含卵白或量量分数甚微;正正在 HPGPC中均隐现为单对称峰,表明其为均一多糖组分,根据尺度曲线logM=1.10e-3.27t/e,=0.993(t为保存时间)求得细茎石斛、细叶石斛、铁皮石斛中性糖的重均相对分子量分别为2.8×1043.0×10412.8×104Da,上述数据表明,铁皮石斛中性糖的相对分子量量弘近于细茎石斛和细叶石斛的相对分子量量。


结语

细茎石斛、细叶石斛和铁皮石斛均含有较高的总多糖,但水溶性多糖量量分数以铁皮石斛和细茎石斛为高,细叶石斛很低(仅为前二者的1/3),而且总多糖和水溶性多糖正正在各部位的散布情况亦有较大差别,水溶性多糖中卵白量、糖醛酸以及中性糖等身分的量量分数也差别.从水溶性多糖的柱色谱阐发,铁皮石斛和其他两种石斛相比同样具有隐著差别至于三种码斛新糖正正在分子机关方面的差别有待进一步研讨。